segunda-feira, 30 de junho de 2014

PROTOCOLO DE COLORAÇÃO PARA TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

COLORAÇÃO AZUL DE TOLUIDINA

Colocar as lâminas em água destilada por 10 min

Azul de toluidina Merk ..................................2 min

Água corrente................................................5 min

Obs: Pode-se fazer uma lâmina teste para ver a coloração. Aumentar e diminuir o tempo de acordo com os resultados.

COLORAÇÃO PAS

Preparo de Soluções

Ácido Periódico:
Ac. Periódico...................................1g

200 ml de água destilada

HCl 1N:
HCl 37%...........................................80,4ml

Água destilada................................919,6ml

Água Sulfurosa:
Metabissulfito de sódio 10%...................36ml

HCl 1N.............................................30ml

Completar para 600ml com água destilada e Dividir em 3 frascos de 200ml cada

Reativo de Schiff
Fucsina Básica.................................2g

HCl 1N..........................................20ml

Metabissulfito de Sódio....................2g

Carvão Ativado.................................4g

Água destilada............................400ml

Técnica para preparar o Schiff:

Ferver a água destilada em um balão volumétrico ou erlemeyer

Remover do calor e adicionar a fucsina básica lentamente agitando (aprox. 5min)

Deixar esfriar para 50°C e adicionar o HCl. Filtrar

Esfriar para 25°C e adicionar o metabissulfito. Agitar bem (aprox. 1hora).

Envolver o recipiente em papel alumínio ou saco preto.

Deixar no escuro overnight.

No dia seguinte, adicionar o carvão e filtrar imediatamente. O filtrado deve se tornar incolor.

TÉCNICA PAS METACRILATO

Colocar as lâminas em água destilada por 10 minutos. Durante esse tempo, preparar o ácido periódico.

Ac. Periódico........................15 min

Água destilada.................. ...10 min

Reagente de Schiff..............45 min

Água Sulfurosa I ...................5 min

Água Sulfurosa II ...................5 min

Água Sulfurosa III ..................5 min

Lavar as lâminas em água corrente por 20 minutos.

Deixá-las na hematoxilina de Myers por 35 minutos.

Lavar novamente em água corrente por 10 minutos.

Secar e montar.

Tempo estimado: 3 horas

Obs: O tempo incubação no reagente de Schiff pode variar segundo a intensidade de coloração dos cortes.


TÉCNICA PAS PARAFINA

Xilol I.........10 min

Xilol II........10 min

Xilol III.......10 min

Álcool absoluto I............1 ou 2 min

Álcool absoluto II.................10 min

Álcool 95%............................5 min

Álcool 85%............................5 min

Álcool 70%............................5 min

Água Corrente.......................5 min

Ácido Periódico 0,5%..........15 min

Lavar em água corrente........5 min

Reativo de Schiff.................20 min (olhar se corou bem, caso não; deixar mais tempo)

Água Sulfurosa I...................5 min

Água Sulfurosa II..................5 min

Água Sulfurosa III.................5 min

Lavar em água corrente......20 min

Hematoxilina.........................5 min

Lavar em água corrente......30 min

Álcool 70%............................5 min

Álcool 85%............................5 min

Álcool 95%............................5 min

Absoluto I..............................5 min

Absoluto II............................10min

Absoluto III...........................15min

Xilol I.......................................5 min

Xilol II.....................................10min

Xilol III....................................15min


COLORAÇÃO DE Hematoxilina e Eosina em Parafina

Preparo de soluções:

Solução saturada de ácido pícrico
Ac. Pícrico............................... 1,3g

Água destilada........................ 100ml

Preparo da Eosina (fórmula Maristane)
Eosina amarelada.............................1,0g

Álcool Absoluto.................................10 ml

Bicromato de potássio.......................0,5 g

Água destilada...................................80ml

Solução saturada de ac. Pícrico.......10 ml

Dissolver a eosina em 10 ml de álcool absoluto.

Dissolver o bicromato em 80 ml de água e adicionar as soluções de ácido pícrico e de eosina.


Etapas

Xilol I........................10 min

Xilol II.......................10 min

Xilol III......................10 min

Álcool absoluto...1 ou 2 min

Álcool absoluto.........10 min

Álcool 95%.................5 min

Álcool 85%.................5 min

Alcool 70%.................5 min

Água corrente.............5 min

Hematoxilina.............20 min

Água Corrente..........20 min

Eosina.........................1 min

Álcool 85%.................mergulhar

Álcool 95%..............3 a 5 min

Álcool Absoluto.........10 min

Alcool Absoluto.........10 min

Álcool Absoluto.........15 min

Xilol I...........................5 min

Xilol II..........................5 min

Xilol III.........................5 min
[he.jpg]
Fonte: http://2.bp.blogspot.com/_VyJBIvMWX04/ReHtSKoCzKI/AAAAAAAAAJw/Iv9eAXKzSyQ/s1600/he.jpg
FONTES:
http://www.icb.ufmg.br/mor/pad-morf/coloracao.htm
http://www.fiocruz.br/ioc/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=1723&sid=32
http://2.bp.blogspot.com/_VyJBIvMWX04/ReHtSKoCzKI

Nenhum comentário:

Postar um comentário